پي سي آر تجزيوزر حل ڪرڻ: اڪثر پڇيل سوال ۽ حل

پوليمورس زنجير رد عمل (پي سي آر) تجزياتي حياتيات ۾ لازمي اوزار ضروري اوزار آهن، معقول تحقيق کان وٺي ڪلينڪ تشخيص تائين جينياتي تحقيق کان آگاهه ڪرڻ جي اجازت ڏيڻ. تنهن هوندي، ڪنهن به پيچيده ڊوائيس وانگر، هڪ پي سي آر تجزياتي مسئلن کي منهن ڏئي سگهي ٿو جيڪي ان جي ڪارڪردگي تي اثر انداز ٿين ٿا. اهو آرٽيڪل بابت ڪجهه عام سوالن جا پتا آهنپي سي آر جو تجزيو ڪندڙمسئلو حل ڪرڻ ۽ عام مسئلن جو عملي حل فراهم ڪندو آهي.

1. منهنجي پي سي آر جو رد عمل ڇو نه آهي؟

صارفين طرفان هڪ عام مسئلن مان هڪ آهي ته ٽارگيٽ ڊي اين اي کي هدف جي رد عمل جي ناڪامي آهي. اهو ڪيترن فتن کي منسوب ڪري سگهجي ٿو:

غلط پرائمر ڊيزائن: پڪ ڪريو ته توهان جا پرائمر ٽارگيٽ تسلسل لاء مخصوص آهن ۽ هڪ بهترين پگھلنگ حرارت (TM). غير پرائمر ڊزائن لاء پرائمر جي ڊزائن لاء سافٽ ويئر اوزار استعمال ڪريو.

ناکافي ٽيمپليٽ ڊي اين اي: تصديق ڪريو ته توهان ٽيمپليٽ ڊي اين اي جو ڪافي مقدار استعمال ڪري رهيا آهيو. تمام گهٽ ڪمزور ٿي ويندو يا نه ئي معرفت.

نموني ۾ روانگي: نموني ۾ آلودگي وارا پي سي آر رد عمل کي روڪي سگھن ٿا. توهان جي ڊي اين اي کي صاف ڪرڻ يا هڪ مختلف ڪ extract ڻ جو طريقو استعمال ڪرڻ تي غور ڪريو.

حل: پنهنجي پرائمر ڊزائن کي چيڪ ڪريو، ٽيمپليٽ جي تسلسل کي وڌايو، ۽ پڪ ڪريو ته توهان جو نمونو انڪشافن تي مشتمل نه آهي.

2. منهنجو پي سي آر پراڊڪٽ غلط سائيز ڇو آهي؟

جيڪڏهن توهان جو پي سي آر پراڊڪٽ سائيز جيترو توقع ناهي، اهو شايد استعمال ٿيل ردعمل يا اجزاء سان هڪ مسئلو ظاهر ڪري سگهي ٿو.

غير مخصوص امپليٽ: اهو ٿي سگهي ٿو جيڪڏهن هڪ پرائمر هڪ غير متوقع سائيٽ تي پابند ڪري سگهي ٿو. هڪ اوزار جهڙوڪ بليز وانگر استعمال ڪندي پرائلن جي خاصيت چيڪ ڪريو.

غلط اينلنگ حرارت: جيڪڏهن انرلنگ حرارت تمام گهٽ آهي، غير مخصوص پابند ٿي سگهي ٿو. تدريسي پي سي آر پاران تجسس جي حرارت جي اصلاح.

حل: پرائمر جي خاصيتن جي تصديق ڪريو ۽ پي سي آر پراڊڪٽس جي درستگي کي بهتر ڪرڻ لاء انڪشاف حرارت کي بهتر بنايو.

3. منهنجو پي سي آر تجزيو ڪندڙ هڪ غلطي پيغام ڏيکاري ٿو. مونکي ڇا ڪرڻ گهرجي؟

پي سي آر جي تجزيور تي غلطي جا پيغام الارم ڪري سگھن ٿا، پر اهي اڪثر ممڪن مسئلن کي ممڪن طور تي اشارا فراهم ڪري سگھن ٿا.

ڪيليبريشن جا مسئلا: پڪ ڪريو ته پي سي آر جو تجزيو ڪندڙ صحيح طريقي سان ترتيب ڏنل آهي. باقائدگي سان گڏ باقاعدي سار سنڀال ۽ ڪيليبريشن چيڪ نازڪ آهن.

سافٽ ويئر گروپ: ڪڏهن ڪڏهن، سافٽ ويئر جا بگ مسئلا پيدا ڪري سگھن ٿا. پنهنجو ڪمپيوٽر ٻيهر شروع ڪيو ۽ سافٽويئر اپڊيٽس لاء چيڪ ڪريو.

حل: مخصوص غلطي ڪوڊ لاء استعمال ڪندڙ جي دستيابي جو حوالو ڏيو ۽ تجويز ڪيل مشڪوڪ قدمن جي پيروي ڪريو. باقاعدي سار سنڀال ڪيترن ئي مسئلن کي روڪي سگھي ٿو.

4. منهنجي پي سي آر جي رد عمل جا نتيجا ڇو آهن؟

غير مطابقت رکندڙ پي سي آر جا نتيجا ڪيترن ئي سببن جي ڪري مايوس ٿي سگهن ٿا.

ريجنٽ ڪيفيت: انهي کي يقيني بڻائي ته سڀئي ريجز، بشمول اينزيمز، بفر، بفر، ۽ اعلي معيار جا آهن. ختم ٿيل يا آلوده ريجنس متغير سبب ٿي سگھي ٿو.

حرارتي چڪرينل ڪيليشريشن: غير مطابقت رکندڙ درجه حرارت سيٽنگن کي متاثر ڪري سگھي ٿو پي سي آر جي عمل کي متاثر ڪري سگھي ٿو. باقاعدي طور تي حرارتي سائيڪلر جي ڪيليبريشن چيڪ ڪريو.

حل: اعلي معيار جي ريجينٽس استعمال ڪريو ۽ توهان جي حرارتي سائيڪلر کي باقائدگي سان حاصل ڪرڻ کي يقيني بڻائڻ لاء باقائدگي سان.

5. پي سي آر جي رد عمل جي ڪارڪردگي کي ڪيئن بهتر ڪجي؟

پي سي آر رد عمل جي ڪارڪردگي بهتر ٿي سگهي ٿي اعلي پيداوار ۽ وڌيڪ قابل اعتماد نتيجا ٿي سگهي ٿو.

رد عمل جي حالتن کي بهتر ڪريو: پرائمرز کي پرائمرز جي مختلف تسلسل استعمال ڪندي تجربو، ٽيمپليٽ ڊي اين ايل 2. هر پي سي آر جو رد عمل بهتر حالتن لاء منفرد حالتن جي ضرورت آهي.

تيز فيدٽي اينزيمز استعمال ڪريو: جيڪڏهن درستگي نازڪ آهي، تيزي سان ڊي اين اي پوليوميمس کي گهٽائڻ لاء هڪ اعلي فيوٽيلٽي ڊي اين اي پوليوميم استعمال ڪرڻ تي غور ڪريو.

حل: توهان جي مخصوص پي سي آر سيٽ اپ لاء بهترين شرطون ڳولڻ لاء هڪ بهترين حالتون انجام ڏيو.

خلا ۾

مسئلو حل ڪرڻپي سي آر جو تجزيو ڪندڙهڪ خوفناڪ ڪم ٿي سگهي ٿو، پر عام مسئلن کي سمجهڻ ۽ انهن جو حل توهان جي پي سي آر جو تجربو بهتر نموني وڌائي سگهي ٿو. انهن عام مسئلن کي حل ڪرڻ سان، محقق پي سي آر جا نتيجا بهتر ڪري سگهن ٿا ۽ معتبر حياتيات ايپليڪيشنن ۾ قابل اعتماد نتيجا يقيني بڻائي سگهن ٿا. باقاعدي سار سنڀال، ريجزٽ جي استعمال جو انتخاب، ۽ رد عمل جي حالتن جو اصلاحات ڪامياب پي سي آر تجزيو لاء چابيون آهن.